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 circRNA服務

circRNA服務?
circRNA熒光素酶報告檢測
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 9470 次瀏覽 | 分享到:

一:技術簡介

Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學發光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

二:應用原理

本實驗適用于驗證circRNA sponge功能,熒光素酶報告基因實驗(luciferaseAssay)是檢測某個circRNA和靶標miRNA特異性結合的重要手段。

其原理簡述如下:

1)構建一個將circRNA特定片段插入到熒光素酶報告基因質粒,如psiCHECK等。

2)將要檢測的miRNA與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此miRNA能夠與circRNA結合,則熒光素酶基因就會下調,熒光素酶的表達量與miRNA-circRNA的作用強度成反比。

3) 加入特定的熒光素酶底物,熒光素酶與底物反應,產生熒光素,通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性,從而判斷miRNA-circRNA的相互作用。

三:服務介紹

miRNAscircRNA吸附,理論上細胞內miRNA的總量不會產生變化,因此無法通過qRT-PCR檢測來判斷miRNA是否吸附。通常只能通過預測可能被吸附的miRNA,過表達circRNA后通過檢測miRNA的下游基因表達差異,間接反映circRNA sponge功能。但這種方法,不能有效說明是circRNA -miRNA直接作用的結果。直接的證據在于Sensor reporter的構建與活性檢測,我公司的技術人員利用psiCHECK質粒,對miRNAscircRNA的關系作出準確判斷。

 

1)采用我公司特有的psiCHECK質粒;
        2)所采用的Luciferase雙熒光報告系統,可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度;
        3)采用瞬時轉染技術,操作簡便、快速,周期短,適用于絕大多數細胞類型。

服務內容
        1PCR擴增circRNA成熟序列,或直接合成結合位點序列;
        2)將上述DNA片段克隆至報告載體psiCHECK質粒;
        3)合成miRNA 模擬物;
        4)將報告載體與miRNA模擬物共轉待檢細胞;
        5)多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平。
客戶提供
        1miRNAcircRNA的信息;

        2)相應檢測細胞株。
我們提供 
        1)克隆含有circRNA或結合位點序列的報告質粒;

        2)檢測結果與完整的實驗報告。
質量保證 
        1)正確的測序結果;

        2)完整的對照實驗分組。